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PCR,即聚合酶链式反应,是对待检测样本中的核酸进行扩增的一种方法。荧光PCR法,又称qPCR法(Quantitative Real-time PCR, qPCR),是生物分子荧光技术发展的产物,即指在核酸扩增反应的过程中,加入以荧光化学物质,并以荧光强度来测定PCR循环后产物中核酸水平。
荧光PCR的概念于1992年被日本科学家提及,并在4年后由美国公司ABI实现产业化。如今,ABI公司在荧光定量PCR仪制造界的地位仍不可撼动,等温核酸试剂盒价格,其三代产品ABI 7500 Real-time PCR system是**使用很广泛的荧光定量PCR仪。
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RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,反应温度在37°C左右。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,等温核酸试剂盒报价,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,等温核酸试剂盒总代理,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有试剂,等温核酸试剂盒,我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测,产物纯化后可用于下游研究。
在这个基础体系中添入不同的酶和探针,就可以实现多样化的RPA应用。举例来说,TwistAmp? exo结合了exo探针技术和核酸外切酶III,能实现数据的实时读取,就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少,适合获得强荧光信号进行动力学分析,不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来,可以一步实现RNA模板的实时扩增。
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重组酶聚合酶扩增技术是近年来建立起的一种新的核酸恒温扩增技术,具有操作简单、灵敏度高、特异性强、可在短时间内**扩增出目的片段等优点,在动物疾病早期诊断、现地检测、进出口**检疫等方面具有良好的应用前景。通过综述RPA技术及其在病毒性猪病**检测中的应用研究进展,以期为更好地防控猪病提供参考。